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蜂胶超临界CO2萃取物的GC指纹图谱研究

日期:2017年8月30日 14:46

蜂胶是蜜蜂从植物的芽孢、树皮或茎杆的伤口采集的树脂与自身分泌物的混合体,它是植物有效成分经过动物深加工的产物,结合了动植物双重功能优势,特别适合人体的吸收和利用。
蜂胶的成分非常复杂,现已发现含有300多种有效成分,包括30多种人体必需的微量元素、20多种氨基酸、30多种黄酮类物质,以及丰富的萜烯类、酶类、多糖等具有生物学活性的天然成分。超临界CO2萃取是安全、高效的高新分离技术,被广泛地应用于天然资源活性物质的提取。从作者已有研究可知,与传统的乙醇萃取物相比,蜂胶的超临界CO2萃取物组分种类更为丰富,尤其是含有大量具有抗癌效果的萜烯类、酯类物质,其免疫活性更为显著。通过GC-MS分析证明,蜂胶超临界CO2萃取物中含有90多种组分。如何建立一种相对简便且科学的分析方法,是识别是否为蜂胶超临界CO2萃取物的重要依据,对于促进蜂胶超临界CO2萃取物制品的规范化生产有着重要的意义。为此,本文提出就蜂胶超临界CO2萃取物的气相色谱(GC)指纹图谱的建立进行深入的研究。
1 测试材料与仪器
样品:蜂胶的超临界CO2萃取产物、蜂胶的醇提产物,江苏大学生物资源工程重点实验室提供。
仪器:HP5890A气相色谱仪、HP3395积分仪、FID 检测器、交联聚乙烯乙二醇毛细管色谱柱,美国惠普公司。
2 色谱条件
色谱柱:HP-INNOWAX 交联聚乙烯乙二醇毛细管色谱柱,检测器: FID离子化检测器。
进样温度和检测温度均为250℃,炉温210℃,载气为高纯氮,其流速为30ml/min。
用正己烷配制浓度为4%(v/v) 的样品溶液,每次进样1ul 。用HP3395 积分仪记录图谱,并通过面积归一化计算各组分的相对含量。
3 试验方法与结果
3. 1 供试品溶液的制备
称取蜂胶样品1000g,置于超临界CO2萃取釜中,在35℃、25MPa下进行萃取3h,得到蜂胶的超临界CO2萃取物102g。取该萃取物1g,用氯仿以0.05g/ml的浓度进行溶解,滤去少量不溶物,并定容至20ml,作为进行GC指纹图谱检测定供试样品。
3. 2 分折方法学研究
精密吸取样品0.2μL,注入气相色谱仪中,按色谱法进行试验,测定并记录图谱。为了考察分析方法的可靠性,对其稳定性、仪器精密度、实验方法的重现性作了相应的考察,结果证明稳定性及重现性良好。
3. 2. 1 稳定性试验
取同一样品,分别在4天内每天进行检测,在每组中选峰4。考察样品中主要色谱蜂的保留时间的一致性,试验结果显示。相对保留时间RSD 均小于0.48%,因此稳定性较好。
3. 2. 2 精密度试验
取上述对照品溶液0.2μL ,连续重复进样5次,考察色谱峰保留时间的一致性。结果显示,各主要色谱峰相对保留时间RSD均小于0.25%。
3. 2. 3 重现性试验
称取蜂胶样品5份,按上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液,考察图谱中主要色谱峰的保留时间的一致性。各主要色谱峰保留时间RSD 均小于0.46%。
3. 3 蜂胶超临界CO2萃取物GC指纹图谱共有峰的确定
7份不同蜂胶供试品溶液GC图谱主要峰的相对保留时间可见,在7份蜂胶供试品溶液的GC 图谱中,17个色谱峰的
相对保留时间范围在0.20%~0.52%之间变化,相对偏差RSD小于0.55%,变化均非常稳定。因此可以确定17个主要峰为共有峰。由于蜂胶超临界CO2萃取物各主要组分会因为萃取条件的改变,其共有峰的面积会有所变化,因此认为以共有峰的相对保留时间作为蜂胶超临界CO2萃取物GC指纹图谱的特征指标比较适宜。7份供试品溶液GC 图谱共有峰的峰面积如表所示,共有峰中峰面积范围在4.9 %~70.38%之间变化,该数值说明,尽管不同蜂胶供试品在主要组分的含量上有较大的差异,但其主要组分的种类基本不变。
3. 4 蜂胶超临界CO2 萃取物GC 指纹图谱的检验
为了检验以上建立的蜂胶超临界CO2萃取物GC指纹图谱的合理性,本文以蜂胶的乙醇提取产物为受试对象、进行了GC图谱的检测,其结果可以发现二者在组分构成上有很大的差异、指纹图谱的特征区别明显,蜂胶超临界CO2萃取物的易挥发性成分远远丰富于醇提蜂胶。
4 讨论
通过7份样品的GC图谱,以谱峰的保留时间为考察指标,确定出17个出峰时间比较稳定的谱峰为共有峰,用17个共有峰来识别蜂胶超临界CO2萃取物的真伪和质量好坏。通过对蜂胶醇提物GC图谱的测定,发现不同提取方法得到提取物在产品品质上有极其显著的差异。

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